单B细胞抗体造备

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• 单克隆抗体(mAb)是很多诊断利用和钻研的沉要工具。此表
  ，单克隆抗体已成为很多疾病的梦想医治用品
  ，在癌症、自身免疫性疾病和习染性疾病的医治中得到了很好的利用。为了钻研和医治主张
  ，已有很多技术用于天生单克隆抗体。单B细胞抗体造备技术是近些年新发展的一种造备单抗的技术。该步骤拥有快率快、通量高、以及抗体沉轻链可变区天然配对的优势
  ，是目前新型、高效的抗体发现步骤之一。

  

  单B细胞抗体造备的道理是每个B细胞只含有一对职能性的沉链和轻链
  ，每个B细胞拥有只产生一种特异性抗体的个性
  ，所以能够直接从单个B细胞中扩增出抗体基因获得单抗。

• 单B细胞抗体造备流程

  

• 单B细胞分选

  凭据钻研利用
  ，能够随机或抗原选择性地从表周血或淋巴组织(如骨髓、脾脏)中分离单B细胞。对于B细胞分离
  ，目前单B细胞分选方式有流式细胞分选法、 磁珠细胞分选法、 显微操作法、 激鲜明微切割法以及微流控分选法。 其中流式细胞荧光分选技术 (Fluorescence activated Cell Sorting
  ，FACS)是目前一种成熟、 有效的单细胞分选步骤。

  

• 单B细胞Ig基因转录、扩增、测序

  从单个B细胞中构建互补DNA (cDNA)为同时辰析表白的IgH和IgL链基因提供了一种正确的步骤。通常
  ，单B细胞cDNA合成是在用于细胞沉积和细胞裂解的设备中进行的(例如96孔板、纳米孔芯片等)
  ，这确保了方便处置大量样品并将交叉传染的风险降至最低。全长Ig可变区基因转录物通过巢氏PCR进行扩增
  ，其中RT-PCR产品可作为第一轮PCR的样品进前进一步反映。

  无论使用何种Ig可变区基因扩增战术
  ，编码抗体特异性的单B细胞Ig可变区基因转录信息随后通过测序得到。而后利用各类数据库
  ，如NCBI的IgBLAST、IMGT
  ，能够很容易地鉴别和分析沉排的V、D和J基因片段是否存在突变、插入和缺失。

• 案例分析: Nectin-4 Mouse Serum Titer

  

• 案例分析: Nectin-4 (4-1) Sorting Single B Cell

  

• 案例分析: Nectin-4 (4-1) Sequencing (Top20)

  

• 案例分析: Nectin-4 (4-6) Sorting Single B Cell

  

• 案例分析: Nectin-4 (4-6) Sequencing (Top20)

  

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